Visător şi bun la inimă, Larry Daley (Ben Stiller), deşi nu prea îl ajută norocul, crede totuşi că e predestinat pentru ceva măreţ. Dar nici măcar el nu şi-a imaginat cât de “măreţ”, atunci când acceptă ceea ce pare să fie munca de jos: paznic de noapte la un muzeu de ştiinţe naturale. În timpul rondului lui Larry, lucruri ieşite din comun încep să aibă loc. Maiaşi, gladiatori romani şi cowboy coboară din diorame ca să dea viaţă bătăliilor legendare. Încercând să descopere focul, un om de neanderthal dă foc propriei vitrine, Attila Hunul (Patrick Gallagher) distruge exponatele din jurul lui, iar un T Rex reaminteşte tuturor ca e cel mai temut prădător.